生物緩沖液是一種能在加入微量酸/堿時保持溶液的pH值相對穩(wěn)定的溶液。生物緩沖液的pH值范圍根據(jù)其pKa值決定。該pKa值定義為50%的分子為酸式結(jié)構(gòu)，50%為堿式結(jié)構(gòu)時的pH值。關(guān)于生物緩沖液的一個常規(guī)原則是，其pH值應(yīng)保證在pKa值左右1個pH值單位范圍內(nèi)，從而保證其具有良好的緩沖能力。如此可以保證同時有足夠的以酸式結(jié)構(gòu)和堿式結(jié)構(gòu)存在的分子在加入H+或者OH-時可以將它們中和。這樣，緩沖液就可以防止pH變化導(dǎo)致的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性改變。

　　很多物質(zhì)都可以用于生物緩沖液。經(jīng)常使用的緩沖液成分通常具有接近中性的pKa值，可在生理pH值范圍左右使用。下面將列出了3種常用的生物緩沖液、各自的pH值應(yīng)用范圍及各自可能對蛋白質(zhì)純化過程產(chǎn)生影響的優(yōu)缺點。為保證足夠的緩沖能力，這些緩沖液的濃度通常為25mM。

　　MOPS緩沖液：PH范圍在6.5-7.9，不能進(jìn)行高壓滅菌處理，PH值一定程度上隨溫度變化，在生理PH值范圍內(nèi)具有高緩沖能力。

　　HEPES緩沖液：PH范圍在6.8-8.2，不能進(jìn)行高壓滅菌處理，PH值一定程度上隨溫度變化，一定條件下會生成自由基。

　　TRIS緩沖液：PH范圍在7.5-9.0，PH值在一定程度上隨溫度或稀釋程度變化，會對部分酶活性造成影響，紫外無吸收，價格便宜。

　　緩沖溶液的作用是在有限的范圍內(nèi)調(diào)整溶液的pH值使待測溶液的酸度符合分析方法所規(guī)定的范圍，比如，苯酚在堿性介質(zhì)及鐵氰化鉀存在下，可與4-氨基安替比林反應(yīng)生成橙紅色的安替比林染料，為了防止芳香胺類的干擾以pH在10士0.2時最為適宜。為此，就需要在待測溶液中加入氨一氯化錢緩沖溶液調(diào)整和控制待測溶液的pH為10.0士0.2。